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Direct detection of Salmonella cells in the air of livestock stables by real-time PCR.
(Détection directe des cellules de Salmonella dans l’air des bâtiments d’élevage par PCR en temps réel).
Article
Publié dans : Annals of Occupational Hygiene, Royaume-Uni, vol. 53, n° 8, novembre 2009, pp. 859-868, ill., bibliogr. (En anglais)
Cet article présente une méthode de dosage (avec SYBR Green en tant que marqueur fluorescent) en temps réel, spécifique pour la détection et la quantification des cellules de Salmonella dans l’air des bâtiments d'élevage, basée sur l’amplification par PCR (Réaction en Chaîne par Polymérase). Un jeu d’amorces spécifiques a été testé et validé pour la détermination des gènes invA (spécifiques de Salmonella) des ADN extraits d’échantillons de bioaérosols. L’application de la méthode à des bioaérosols de poulaillers a montré des concentrations s’échelonnant de 2,2 × 101 à 3 × 106 cellules cibles de Salmonella par m3 d’air. Pour quelques échantillons, Salmonella a aussi été détecté par une technique de culture qui a révélé des concentrations de 2 à 3 fois mois importantes que celles obtenues par la méthode de biologie moléculaire étudiée. La spécificité des résultats a été démontrée par clonage des produits PCR, qui ont été attribués exclusivement au genre Salmonella. Cependant par les méthodes moléculaires, les micro-organismes sont détectés sans tenir compte de leur viabilité, et donc il s’en suit une surestimation des concentrations. Pour cette raison, le taux de survie des cellules de Salmonella a été mesuré sur les surfaces des filtres lors des échantillonnages par filtration : 82 % des cellules mouraient en 20 minutes de filtration. Les résultats montrent clairement la spécificité et la commodité du dosage quantitatif par PCR pour l’analyse et la quantification des salmonelles dans les bioaérosols. Il est démontré que les concentrations de Salmonella dans l’air des lieux de travail des élevages de volailles atteignent jusqu’à 3,3 % des chiffres de la numération totale des cellules effectuée au moyen du 4’,6-diamidino-2-phénylindole.